Resumo

A Tuberculose (TB) é uma doença re-emergente e negligenciada que constitui um sério problema para a saúde pública mundial. O Mycobacterium bovis BCG é a única vacina disponível contra TB, mas a sua eficácia contra a forma pulmonar em adultos é variável. A cepa BCG Moreau é usada no Brasil como vacina desde os anos 1930, mas poucos estudos visaram correlacionar sua eficácia protetora com dados moleculares. Os genes rv3407 e rv3408 codificam proteínas de um sistema toxina-antitoxina (TA) e encontram-se próximos à deleção genômica RD16, específica de BCG Moreau. Esta deleção inativa o gene rv3405c, codificante para um fator transcricional (repressor da família TetR). Este trabalho visa avaliar a função deste sistema TA em BCG Moreau, na busca de possíveis impactos da deleção RD16. Nossos resultados de RT-PCR confirmam que rv3407-3408 são co-transcritos e indicam um perfil de expressão diferenciado quando comparamos as cepas de BCG Moreau e Pasteur, possivelmente devido à inativação de Rv3405c como consequência da deleção RD16. Ao nível protéico, produzimos soro policlonal contra Rv3407 para visualizar sua acumulação. Análise por western blot indica que Rv3407 é mais expressa em BCG Moreau do que em Pasteur na fração de proteínas intracelulares. Para visualizar Rv3408 usamos géis bidimensionais, onde o mesmo perfil de Rv3407 foi observado; entretanto, na fração de proteínas associadas à superfície bacteriana, Rv3408 encontra-se em maior quantidade em BCG Pasteur do que em Moreau. Quanto à função das proteínas TA, mostramos que Rv3407 forma complexo com o DNA da região promotora do operon, confirmando a predição desta proteína ter um papel na sua regulação transcricional. Da mesma maneira, o possível papel de Rv3408 como toxina foi confirmado, já que sua expressão em forma recombinante inibe crescimento de E. coli. Estruturas para ambas as proteínas foram geradas através de modelagem molecular, indicando que a antitoxina Rv3407, com domínio Phd_YefM dimérico, pode formar um complexo com a toxina Rv3408, de domínio PIN. Por causa da importância biotecnológica e farmacêutica dos genes TA, acreditamos que estes estudos poderão fornecer subsídios para a identificação de novos alvos terapêuticos contra a tuberculose. Esperamos também contribuir para o melhor conhecimento da biologia da cepa vacinal brasileira, BCG Moreau.